KLONING FRAGMEN DNA GENOM YANG TERLIBAT DALAM TOLERANSI ASAM-ALUMINIUM PADA BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM

Rika Indri Astuti, Dewi Monasari, Sarah Asih Faulina
Departemen Biologi, Fakultas MIPA, Institut Pertanian Bogor.

ABSTRAK

Mutan sensitif asam-aluminium dari bakteri Bradyrhizobium japonicum galur 38 (AAS38) berhasil dikonstruksi melalui mutagenesis transposon untuk mengidentifikasi gen yang terlibat dalam sifat toleransi asam-aluminium pada bakteri bintil akar kedelai, B. japonicum. Transposon ditransfer ke dalam sel B. japonicum toleran asam-Al melalui proses konjugasi antara sel Escherichia coli S17-1 (λ pir) yang membawa pUTmini-Tn5Km1 dengan B. japonicum toleran asam-Al pada tiga waktu inkubasi mating yang berbeda. Frekuensi transkonjugasi tertinggi sebesar 6.5 x 10-7 cell tiap resipiennya setelah inkubasi mating selama 18 jam. AAS38 tidak mampu tumbuh pada media Ayanaba (pH 4.5) yang ditambahkan 50 μM aluminium. Fragmen DNA sebesar 0.8 kb berhasil diisolasi dengan teknik inverse polymerase chain reaction (Inverse PCR) dari genom AAS38. Fragmen tersebut berhasil diklon ke dalam pGEM-T Easy (~3 kb) untuk mendapatkan plasmid rekombinan yang didesain sebagai pGEMT-38 (~3.8 kb).

Kata kunci: Bradyrhizobium japonicum, Toleran asam-aluminium, Transposon Mutagenesis, Kloning

Download Jurnal